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昆蟲(chóng)ELISA試劑盒操作流程細(xì)則

更新時(shí)間:2018-10-27      瀏覽次數(shù):2651
昆蟲(chóng)ELISA試劑盒中文簡(jiǎn)稱(chēng):酶聯(lián)免疫法或酶免法問(wèn):什么是種屬?什么是樣本?答:①種屬就是所謂的,客戶測(cè)得樣本來(lái)源是從什么動(dòng)物,植物,人,等,提取
的樣本,針對(duì)每個(gè)種屬有想對(duì)應(yīng)的試劑盒,例如,從人的部位,收集的樣本,種屬就是人。那試劑盒就是測(cè)人的什么什么指標(biāo)?動(dòng)物的就測(cè)動(dòng)物的什么指標(biāo)等等。
②客戶從種屬身上提取的,包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿,唾液等標(biāo)本,(能溶的一般情況下都可以測(cè))
昆蟲(chóng)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)操作流程如下:
(1)待測(cè)樣品孔中每孔加入待測(cè)樣品100μl,每種樣品設(shè)3個(gè)平行孔;設(shè)兩個(gè)陰性對(duì)照孔,每孔加未處理組的細(xì)胞裂解液100μl;另設(shè)一個(gè)空白對(duì)照孔,加入純細(xì)
胞裂解液100μl。
(2)酶標(biāo)板置4℃,包被過(guò)夜。
(3)洗板:吸干孔內(nèi)反應(yīng)液,用洗滌液過(guò)洗一遍(將洗滌液注滿板孔后,即甩去),之后將洗滌液注滿板孔,浸泡1-2分鐘,間歇搖動(dòng)。甩去孔內(nèi)液體后在吸水紙
上拍干。重復(fù)洗滌3-4次。
(4)陰性對(duì)照孔每孔加入PBS 50μl,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl。
(5)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)昆蟲(chóng)ELISA試劑盒每孔加1:5000稀釋的HRP-標(biāo)記的山羊抗兔抗體工作液 100μl。
(8)酶標(biāo)板置37℃培養(yǎng)箱的濕盒內(nèi),孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl,輕輕混勻10s,置37℃暗處反應(yīng)15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。
(12)昆蟲(chóng)ELISA試劑盒分別測(cè)450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,終測(cè)得的OD值為兩者之差(W1-W2),以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光干擾。
(13)數(shù)據(jù)處理:在得出標(biāo)本(S)和陰性對(duì)照(N)的 OD值后,計(jì)算S/N值。S/N≥21為陽(yáng)性判定標(biāo)準(zhǔn)。
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